QN1080 非變性組織/細胞裂解液
- 產品/服務：QN1080 非變性組織/細胞裂解液
- 型 號：QN1080
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：852
產品簡介
北京百奧萊博供應的非變性組織/細胞裂解液用于生化實驗研究等領域，非變性組織/細胞裂解液是我司眾多優質蛋白質研究之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括非變性組織/細胞裂解液在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：非變性組織/細胞裂解液
英文名稱：Native lysis Buffer
產品貨號：QN1080
產品規格：100ml
非變性組織/細胞裂解緩沖液內含非離子型去垢劑，能裂解細胞并在非變性條件下釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。非變性條件下的裂解蛋白產物zuì大限度地保留了蛋白的特性和功能，如抗原-抗體結合或酶學活性，因此適宜于進行免疫共沉淀。另外，有些抗體對非變性蛋白具有更高的結合能力或只能識別非變性蛋白的抗原位點，這種情況應該使用非變性裂解。
使用方法：
根據使用量，取每1ml裂解液加入10ul的PMSF，使PMSF的zuì終濃度為1mM。混勻備用(PMSF現用現加)。
1、樣品前處理：
a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150～250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸，冰上放置裂解 5-10 分鐘。
b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液，冰上放置裂解 5～10 分鐘。期間可以用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50～100萬細胞/管，然后再裂解。
c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每 20 毫克組織加入 150～250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
充分裂解后，將裂解后的樣品 10000～14000g 離心3～5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀、免疫共沉淀等操作。
注意事項：
1、為取得zuì佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃進行。裂解時間可根據實驗要求進行優化處理。
2、非變性蛋白裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用 BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的 Triton X-100 等干擾物質，不能用 Bradford 法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
3、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
儲存條件 ：4℃，有效期1年
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規格：100mL
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產品特點：
1.快速裂解，多種裂解成分經過精心優化，能快速使細胞裂解。
2. 非變性(BTN80807A)產品能zuì大程度地保留蛋白天然結構和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，還可以用于蛋白活性檢測(信號傳遞研究和酶動力學檢測)和Western Blot等各種后續實驗。
3.變性(BTN80807B)裂解細胞的效率更高，主要用于對抗原空間構型不敏感的免疫共沉淀實驗，還可以用于Western Blotting。
4.適用于培養細胞(包括懸浮細胞)和新鮮組織。
儲存條件：常溫運輸、4℃保存，有效期一年。
注意事項：
1. 如果在本產品中額外再加入終濃度為1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。
2. 如果用于信號傳遞研究，zuì好在本產品中加入終濃度為1×的、新鮮配制的磷酸酶抑制劑復合物。
3. 整個裂解步驟都要在冰浴或4℃操作。本產品和PBS 均需預先冷卻。
4. 本產品所含有較高濃度的去垢劑會對Bradford蛋白濃度測定有較大影響，因此只能使用BCA法測定蛋白濃度。
使用方法：
一：處理貼壁的培養細胞
1. 去除貼壁細胞培養液，用冰浴預冷的PBS 洗兩遍，去盡殘留的PBS。
2. 將培養板放置在冰上待用。
3. 按每106個細胞加入0.1mL 本產品(或100mm 貼壁細胞加1mL 本產品)的比例向培養板中加入適量的本產品(按此比例裂解得到的裂解物的蛋白濃度約在5-10mg/mL 之間)。
注意：裂解效率跟細胞數量和本產品用量的比例密切相關。一般情況下6孔板的單孔(1～2×106細胞)需要0.1～0.2mL本產品；25 cm2培養瓶(3～6×106細胞)需要0.3~0.6mL；75 cm2培養瓶(1～2×107細胞)需要1～2mL。對于特別大或特別小的細胞，需要用戶摸索zuì佳用量。
4. 冰上放置10-30分鐘(zuì佳時間跟細胞系相關)，其間偶爾輕輕搖晃或用槍頭輕輕吹打。
5. 將細胞培養板傾斜使上清液匯集在一端，并將其全部轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中。
6. 15000×g，4℃離心10分鐘，將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中，放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
7. 用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
二：處理懸浮細胞
1. 400×g，4℃離心10分鐘收集懸浮細胞，棄上清。
2. 用等體積的預冷PBS 洗滌細胞沉淀兩遍，步驟同步。
3. 按每106個細胞加入0.1mL 本產品的比例加入本產品，充分懸浮細胞。
4. 冰上放置15分鐘裂解細胞，期間偶爾輕柔震蕩。
5. 15000×g，4℃離心10分鐘，將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中。為避免吸取到細胞沉淀，zuì好留20-40μL液體不取。
6. 將上清液放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
7. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
三：處理組織塊
1. 稱量組織塊，用毛玻片或玻璃勻漿器研磨或勻漿，用5-10倍體積的、預冷的PBS洗兩次(包括沖洗器材)。
2. 將勻漿物轉移到離心管中，1500g、4℃離心5分鐘后棄上清。
3. 按每50mg 組織加入0.2mL 本產品的比例加入預冷的本產品，吹打混勻，放置冰上。
4. 每隔5分鐘振蕩器輕柔振蕩一次，共4次。
5. 15000×g、4℃離心10分鐘，將上清轉移到一個新的1.5mL塑料離心管中，放置在冰上待用或放-80℃長期保存。注意：如果用于免疫沉淀，zuì好新鮮使用。
6. 使用前zuì好先測定上清液的蛋白濃度，然后再進行后續的電泳、Western或免疫沉淀操作。
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