KFS002 檸檬酸鈉抗原修復液(50X)
- 產品/服務：KFS002 檸檬酸鈉抗原修復液(50X)
- 型 號：KFS002
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：833
產品簡介
檸檬酸鈉抗原修復液(50X)由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的檸檬酸鈉抗原修復液(50X)品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括檸檬酸鈉抗原修復液(50X)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：檸檬酸鈉抗原修復液(50X)
產品貨號：KFS002
產品規格：100ml
檸檬酸鈉抗原修復液是一種zuì常用的抗原修復液，可以用于石蠟切片、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復。細胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，會導致蛋白之間的交聯(cross-l
通常石蠟切片都需進行抗原修復處理，而冰凍切片可以不進行抗原修復處理。抗原修復會大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對于冰凍切片的染色效果很多文獻資料表明也有顯著改善。特別是當冰凍切片免疫染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進行抗原修復。從原理上來看，無論冰凍切片還是細胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進行抗原修復都會有效去除蛋白之間的交聯，充分暴露抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。
本產品特別適合用于石蠟切片，也可以用于冰凍切片等其它樣品。通常石蠟切片都需進行抗原修復處理，而冰凍切片可以不進行抗原修復處理。抗原修復會大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對于冰凍切片的染色效果很多文獻資料表明也有顯著改善。特別是當冰凍切片免疫染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進行抗原修復。從原理上來看，無論冰凍切片還是細胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進行抗原修復都會有效去除蛋白之間的交聯，充分暴露抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。本產品特別適合用于石蠟切片，也可以用于冰凍切片等其它樣品。
一個包裝的本產品可以配制成5000 毫升抗原修復液(1X)。按照每個片子需要10 毫升抗原修復液(1X)計算，一個包裝的本產品可以用于500 個樣品。
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名稱：一站式GST標記蛋白質微量純化套裝(含溶菌酶和核酸酶)
貨號：BTN111116B
規格：20次
重組蛋白N端的GST谷胱甘肽S轉移酶能提高重組蛋白的水溶性，所以常用于蛋白質重組表達。GST-谷胱甘肽親和層析是利用GST 標記的蛋白能與谷胱甘肽層析介質結合，并能被還原型谷胱甘肽洗脫的特點而建立，是目前分離純化GST 標記蛋白質的重要方法。本產品就是專門用于上述目的，其原理如下：
產品特點：
1．一站式套裝，含所需的谷胱甘肽介質、溶液和層析柱，用戶只需要提供表達GST 標記蛋白的細菌(酵母、桿狀病毒、培養細胞)即可，非常方便。
2．專一性強，一次過柱即可獲得純度高達95%的GST-標記蛋白。
3．只能在非變性條件下使用，只可用于純化沒形成包涵體的GST 標記蛋白。
4．每次可以處理20mL的表達菌液，適合初步篩選和鑒定。
5．提供4mL濃度為50%的谷胱甘肽-Agarose 介質，可吸附5-10mg GST 標記蛋白質。
6．本介質可以反復使用多次。
試劑盒組成：
| 成分 | 20次(A) | 20次(B) |
| 谷胱甘肽-Agarose介質,50% | 4ml | 4ml |
| 10×PBS緩沖液 | 100ml | 100ml |
| 溶液A | 1ml | 無 |
| GST洗脫緩沖液成分一 | 25ml | 25ml |
| GST洗脫緩沖液成分二 | 約80mg | 約80mg |
| 溶菌酶(20KU/mg) | 無 | 30mg |
|
Benzo | 無 | 20μl |
| PMSF(10mg/mL) | 0.5ml | 0.5ml |
| 6mL層析柱(帶篩板) | 1套 | 1套 |
| 說明書 | 1份 | 1份 |
儲存條件：常溫運輸和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低溫運輸。收到貨后，介質需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
注意：
1．每步得到的樣品zuì好都留存少量作為SDS-PAGE分析的對照，在下面描述中就不再提醒。
2．本實驗需要用到的1×PBS緩沖液可用自備的超純水稀釋本試劑盒提供的10×PBS緩沖液而得。PBS緩沖液用超純水稀釋后其容易長細菌，注意防止污染。
3．GST 洗脫液的配制方法是將約80mg GST 洗脫液成分二干粉全部加入到GST 洗脫液成分一溶液中，搖晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脫液，分裝成小份放-20℃保存，每次用一管。
一、重組蛋白的表達和細菌收集
1．37℃振蕩培養20mL含表達質粒的細菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到終濃度為0.1mM，30℃振蕩培養3小時或22℃振蕩培養8小時(或過夜)。
3．4℃ 5000g離心10分鐘收集20mL表達菌液，棄上清。
4．用1×PBS緩沖液重懸細菌沉淀，4℃ 5000g離心10分鐘，棄上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二、細胞裂解
5．如果用本產品A型，用1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(1mL 1×PBS緩沖液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重懸細菌沉淀，冰上超聲裂解菌體直到在顯微鏡下看見大多數細胞破裂。超聲參數需根據儀器型號自行摸索，一般選1K-10K 頻率處理15次，每次20秒，間隔1分鐘(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否則會堵塞層析柱。
6．如果用本產品B型，在1mL冰浴的新鮮配制的細胞裂解液(在20mL 1×PBS緩沖液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分裝成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重懸細菌沉淀后冰上放置30分鐘，得到細菌裂解物。
7．將超聲或酶法細胞裂解物在13000 g 4℃離心10分鐘去除未裂解細胞和裂解細胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 標記蛋白。
三、層析柱的制備和GST蛋白純化
8．搖晃將谷胱甘肽-Agarose 介質充分混勻后，取適量加入到預放了一片篩板的層析柱中(介質用量需要根據GST蛋白產量決定，100mL菌液一般使用200μL介質即可)。下列步驟各溶液的用量均針對200μL介質而定，如果介質用量不同，各溶液用量需相應調整。
9．用5mL預冷的1×PBS緩沖液洗柱。
10．將第7 步得到的上清液(含可溶性GST標記蛋白)上柱，讓重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE電泳。GST和谷胱甘肽之間的結合很緩慢，所以流速一定不能快，否則結合不充分。流速一般在0.2-1mL/分鐘即可。如要提高GST 標記蛋白與介質的結合效率，可用本試劑盒提供的紅蓋將層析柱下的漏液口堵上，讓細菌裂解液和介質在4℃結合30分鐘或過夜。也可以將穿透液反復上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS緩沖液洗柱，收集并保存穿透液(含雜蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脫液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 標記蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后續處理(如濃度測定或SDS-PAGE電泳)或-80℃長期放置。
13．對收集的2種穿透液和洗脫液進行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不預先脫鹽，則只能用Bradford法或OD 檢測法(1 OD280 約等于0.5mg/mL蛋白)測定穿透液和洗脫液的蛋白濃度。由于GST的分子量為26 KD，所以在SDS-PAGE膠上，GST 標記蛋白將比天然蛋白大26 KD。
附：GST柱的恢復(本試劑盒不含所需試劑)
1．用3倍體積的6M鹽酸胍處理柱子10分鐘。
2．用3倍體積的超純水處理柱子10分鐘。
3．用3倍體積的緩沖液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)處理柱子10分鐘。
4．用3倍體積的緩沖液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)處理柱子10分鐘。
5．再重復3-4 步兩次。
6．用3倍體積的超純水處理柱子3次。
7．用3倍體積的1×PBS緩沖液處理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍體積的1×PBS緩沖液待用。若長時間不用，則第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。
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