二代測序接頭引物試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多二代測序接頭引物試劑盒等基因結構和功能產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括二代測序接頭引物試劑盒(Illumina平臺 Index Primer13-24)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：二代測序接頭引物試劑盒(Illumina平臺 Index Primer13-24)
英文名稱：NGS Multiplex Oligos For Illumina(Index Primers Set II)
產品貨號：WE0240
產品規格：24次|96次

  本試劑盒提供了二代測序建庫中使用的adaptor與primer，專為illumina平臺建庫設計，index primer的設計可滿足多重高通量測序時制備多個文庫樣本的需要，制備的文庫可用于Illumina GAIIx，HiSacnSQ、HiSeq 2500/2000/1000和MiSeq sequencing等測序平臺的測序。

試劑盒組成：

組份	24次	96次
Adaptor for Illumina	60μl	240μl
Universal Primer for Illumina	30μl	120μl
Index 13 -27 Primers for Illumina	12×10 μ l	12×20 μ l

自備儀器、試劑和耗材
1、磁力架：建議使用DynaMagTM-2(貨號： 12321D)。
2、DNA純化回收試劑盒：建議使用百奧萊博磁珠法DNA純化回收試劑盒(貨號： WE0205)。
3、DNA建庫試劑盒：建議使用百奧萊博二代測序快速DNA建庫試劑盒(貨號： WE0229)。
4、無水乙醇。
5、反應管：建議使用低吸附的PCR管與1.5ml離心管；槍頭：建議使用高質量過濾槍頭防止試劑盒、文庫樣本污染。

實驗前準備及重要注意事項：
1、Adaptor為雙鏈結構，請勿將其置于室溫溫度以上，以免發生解鏈、影響使用。
2、Index primer開蓋前請短暫離心，使液體收集到管底，以免不同引物間交叉污染。

使用流程


操作步驟：

百奧萊博二代測序多樣本接頭引物試劑盒使用方法請按照百奧萊博二代測序快速DNA建庫試劑盒(Cat .No.WE0229)protocol進行。

Adaptor for Illumina：
5′-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3′
5′-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3′
Universal Primer for Illumina：
5-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T -3′
Index 13–27 Primers for Illumina：

	Index Primers for Illumina	Index
Index 13 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTGTTGACTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	AGTCAA
Index 14 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATACGGAACTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	AGTTCC
Index 15 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTCTGACATGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ATGTCA
Index 16 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGGGACGGGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	CCGTCC
Index 18 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATGTGCGGACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTCCGC
Index 19 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGTTTCACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTGAAA
Index 20 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATAAGGCCACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTGGCC
Index 21 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTCCGAAACGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GTTTCG
Index 22 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATTACGTACGGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	CGTACG
Index 23 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATATCCACTCGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	GAGTGG
Index 25 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATATATCAGTGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ACTGAT
Index 27 Primerfor Illumina	5-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATAAAGGAATGTGACTGGA GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-s-T-3′	ATTCCT

儲存條件：-20℃

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名稱：人基因組DNA定量試劑盒
貨號：WE0230
規格：1ml|5ml
  本產品是采用探針法進行實時熒光定量PCR(qPCR)，實現對從各種樣品(石蠟樣本、流式分選的細胞、血清或血漿樣本及少量臨床樣本等)中抽提的DNA進行濃度和質量的準確檢測。產品提供了qPCR過程中所需的全套試劑，包括反應混合液，引物混合物，標準品，只需添加提取好的DNA即可開始實驗，操作簡單方便、省時省力。反應混合物使用了、快速的熱啟動BaldStar Taq DNA Polymerase，擴增靈敏度高，特異性好，縮短了程序反應的時間。
  ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產生的熒光信號誤差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴增儀。不同儀器的激發光學系統有所不同，因此ROX染料的濃度必須與相應的熒光定量PCR儀相匹配。
  不需要ROX校正的儀器：Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的儀器：ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的儀器：ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

名稱：ALDH1 mRNA原位雜交試劑盒
貨號：ZN0050
規格：100T
基本信息：
保存條件：4℃保存一年
工作量：100張切片。
有效期：一年。
適用種屬：human
標記方式：3’—尾段標記
試劑盒中內容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.預雜交液 2ml；
3.ALDH1 mRNA原位雜交試劑盒寡核苷酸探針雜交液 2ml；
4.封閉液 5ml；
5.生物素化鼠抗dì高辛 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化過氧化物酶 5ml。
用戶自備試劑：
原位雜交專用蓋玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位雜交用 PBS)
一．培養細胞和冰凍切片
準備工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%檸檬酸——100ml蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7?H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸餾水中加氯化鈉17.6g，檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3?2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸餾水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸餾水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸餾水即可。
原位雜交用PBS(1000ml蒸餾水加氯化鈉30g,Na2HPO4?12H2O 6g,NaH2PO4?2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養，條件為37℃和5%的CO2，所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3．培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7．預雜交：濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。
9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗
11.滴加生物素化鼠抗dì高辛：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加生物素化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時蘇木素復染，充分水洗。
16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。
二．石蠟切片
如果有條件的話，應盡可能地采用新鮮標本。標本離體后，及時予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊，固定1小時即可，較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感，如動物大腦，固定時間30-40分鐘，一般不要超過1小時。
1．常規脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3．石蠟切片經常規脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化3--30分鐘(視標本新舊、厚薄自行調整)。用戶可以比較不同的消化時間，例如5分鐘,10分鐘，20分鐘，30分鐘。以找到zuì佳的消化時間。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。其余步驟和冰凍切片6-16步相同。
結果觀察：
ALDH1的細胞胞漿著色呈棕黃色。
注意事項：
由于特定的mRNA序列僅占總mRNA的少數，加上基因僅由四個堿基排列組合而成，因此原位雜交容易出現非特異性染色。通過不加探針和用陰性標本做對照，基本可以確定染色是否為特異性的。有明顯的非特異性染色現象時，用預雜交液對含探針的雜交液進行稀釋，一般稀釋2—10倍；并應加強探針雜交后的洗滌。如果有少量的細胞核著色屬于正常情況；如果出現大量的細胞核著色，往往和標本固定時間過長有關，應重新處理標本。

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