MT0048 質粒小量提取試劑盒
- 產品/服務：MT0048 質粒小量提取試劑盒
- 型 號：MT0048
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1052
產品簡介
質粒小量提取試劑盒是高品質的DNA提取純化產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，我公司的質粒小量提取試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括質粒小量提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：質粒小量提取試劑盒
英文名稱：Plasmid small quantity extraction kit
產品貨號：MT0048
產品規格：100T
本試劑盒采用了一種的離子交換柱，在特定條件下，使質粒能在離心過柱的瞬間結合到質粒純化柱上，在一定條件下又能將質粒充分洗脫，從而實現質粒的快速純化。該質粒提取試劑盒采用改進的質粒抽提系統，徹底解決了RNA污染的問題。的離子交換柱具有高達40μg的結合能力，每個純化柱可用于抽提1-5ml LB培養過夜的大腸桿菌菌液，抽提所得的質粒的OD值一般在1.80左右。 由本試劑盒抽提所得的質粒可直接用于轉化、DNA測序、PCR、基于PCR的突變、體外轉錄、酶切等。
產品組成：
| 組分 | 規格 |
| Buffer A(重懸液) | 25ml |
| Buffer B(裂解液) | 25ml |
| Buffer C(結合液) | 30ml |
| Washing Buffer(洗滌液) | 20ml |
| Elution Buffer(洗脫液) | 10ml |
| RNaseA(20mg/ml) | 0.5ml |
| 吸附柱及套管 | 100套 |
保存條件：室溫避光保存，有效期2年。(RNase A置于-20℃保存)
操作方法：
1．取過夜培養的菌液 1.8ml 加入到 2ml EP管中，13000rpm 室溫離心1分鐘 后收集細菌沉淀。倒掉上清液，可再次加入菌液 1.8ml，離心后去除上清液。
2．每管加入250μl Buffer A（確認已經加入RNase A），用吸頭吹打沉淀菌體至無可見細菌團塊，以確保沉淀完全散開。
3．每管加入250μl Buffer B，輕輕顛倒離心管 4～6 次，室溫放置 2 分鐘，使細菌完全裂解，溶液應變的透明。切勿劇烈振蕩，否則會導致基因組DNA 斷裂，從而導致所得質粒被基因組DNA 污染。
4．每管加入350μl Buffer C，隨即顛倒離心管 4～6 次混勻(切勿劇烈振蕩)，可見白色絮狀物產生，室溫靜置 1分鐘。
5．手腕用力上下振蕩 4～6 次，使白色絮狀物振散，然后置于離心機上 13000rpm 室溫離心10分鐘。
6．將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質粒純化柱內，13000rpm離心30s，倒棄收集管內液體。(切勿吸入白色沉淀，否則會堵塞離心柱)。
7．在質粒純化柱內加入500μl Washing Buffer(務必確認已加入無水乙醇)，13000rpm 室溫離心30s，洗去雜質，倒棄收集管內液體。
8．重復步驟7 一次。
9．將吸附柱重新放入套管中，13000rpm 室溫空離心2分鐘。
10．將質粒純化柱置于新的1.5ml離心管上，靜置 2分鐘，使痕量乙醇完全揮發，加入80-120μl Elution Buffer 至管內柱面上，放置 1分鐘。Elution Buffer 使用前zuì好 50℃ 水浴預熱。
11．13000rpm 室溫離心2分鐘，所得液體即為高純度質粒。
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試劑盒組成：
| 組份 | 50次 | 200次 |
| Buffer PB | 30ml | 120ml |
| Buffer PS | 15ml | 60ml |
| Buffer PW(濃縮) | 6ml | 25ml |
| Buffer EB | 10ml | 30ml |
| 離心吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
產品特點
1、快速簡單：操作步驟少，15分鐘完成，同時可處理多個樣品，節省時間。
2、回收率高：硅基質膜技術和試劑配方保證每次zuì大量回收到純度高的目的DNA。
3、處理量大：每個離心吸附柱每次zuì多可吸附的DNA 量為10μg。
自備試劑：無水乙醇。
實驗前準備及重要注意事項：
1、所有組分可在干燥、室溫(15～30℃)環境穩定保存1年，更長時間保存可置于2- 8℃。當溶液低溫保存時,使用前需在室溫中放置一段時間，恢復至室溫后使用。
2、本試劑盒可無選擇性回收溶液中所有DNA片段，如需選擇性回收特定片段，同時去除其他不同大小片段，請選擇我公司的膠回收試劑盒(WE0168)
3、次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。
4、使用前請檢查Buffer PB是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。
5、回收效率與初始DNA量和洗脫體積有關，初始量越少，洗脫體積越少，回收率越低。
6、所有離心步驟均可室溫下進行。
操作步驟：
1、估計DNA反應液的體積，加入5倍體積的 Buffer PB，充分混勻(無需去除石蠟油或礦物油)。
注意：
1)如DNA反應體系為50μl(不包括石蠟油體積)，則加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后檢測溶液的pH值，若pH值＞7.5，可向其中加入10-30μl的3 M醋酸鈉(pH5.0)，從而將pH值調到5-7。
2、柱平衡：向已裝入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
3、將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置1分鐘，13000rpm離心30-60 s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容積為750μl，若樣品體積大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)13000rpm離心30-60 s，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
注意：如果純化的DNA用于鹽敏感實驗(例如平末端連接實驗或直接測序)，建議加入Buffer PW后靜置2-5分鐘再離心。
5、13000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的乙醇。
6、將吸附柱放到一個新離心管(自備)中，向吸附膜中間位置懸空滴加30-50μl Buffer EB，室溫放置1分鐘。13000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)。
2)為了提高DNA的回收量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置2分鐘，13000rpm離心1分鐘。
3)洗脫體積不應小于30μl，體積過少會影響回收效率。
4)回收＞10 kb的DNA片段時，Buffer EB應在50℃水浴中預熱，適當延長吸附和洗脫時間，可增加回收效率。
儲存條件：室溫(15～30℃)。
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