RFT057 BCA蛋白濃度試劑盒
- 產品/服務：RFT057 BCA蛋白濃度試劑盒
- 型 號：RFT057
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：908
產品簡介
BCA蛋白濃度試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品僅用于生物化學研究方面，我公司的BCA蛋白濃度試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括BCA蛋白濃度試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：BCA蛋白濃度試劑盒
英文名稱：BCA Protein Assay Kit
產品貨號：RFT057
產品規格：500次
BCA蛋白濃度測定試劑盒的原理是蛋白質分子中肽鍵結構在堿性環境下能與Cu2+生產絡合物，并將Cu2+還原成Cu+，而BCA試劑可以特異性地與Cu+結合，形成穩定的有顏色的復合物，并在562nm處有zuì大的光吸收值，該復合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可以根據吸收值的大小來測定蛋白的含量。本試劑盒可以檢測500個樣品(使用微孔板)或50個樣品(使用試管)。
試劑盒組成：
| 組份 | 包裝 | 貯存方式 |
| BCA試劑A | 100 ml | RT |
| BCA試劑B | 3 ml | RT |
| 牛血清白蛋白(BSA)標準溶液(5 mg/ml) | 2×1 ml | -20℃ |
| PBS溶液 | 10 ml | 4℃ |
| 說明書 | 1份 |
產品特點：
1、靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml(在20-1000μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系)，zuì小檢測蛋白量達到0.2μg，待測樣品體積為1-20μl。
2、BCA法測定蛋白濃度的zuì大優點是蛋白濃度的測定可以耐受高濃度的去垢劑，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。
儲存條件：室溫，有效期12個月。
根據您的關注的BCA蛋白濃度試劑盒，您可能還對以下產品有需求：
名稱：5×SDS-PAGE上樣液
貨號：BTN81204
規格：1mL
本產品是專門用于SDS-PAGE電泳樣品上樣用的緩沖液，其濃度為5×，配膠時即開即用，非常方便。
儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。
名稱：一站式蛋白質非變性PAGE電泳套裝(高pH)
貨號：BTN81212A
規格：30次
非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native PAGE)是目前電泳法分離活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根據分子量大小分離蛋白質不同，它是根據蛋白質分子大小、形狀、電荷密度三個主要參數分離蛋白質。由于蛋白質的pI各不相同，所以對不同蛋白質需要選用具有不同pH的電泳體系。單獨配制不同pH的Native PAGE電泳膠十分繁瑣，為此本公司開發了本產品。
產品特點：
1．即開即用，不需單獨準備各種成分，十分方便。還免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺
2．非變性，電泳過程中蛋白質保持天然的構象和亞基之間的相互作用，得到的蛋白質一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白沒有活性)。
3．可用于分析蛋白質和DNA或RNA的相互作用、蛋白修飾、蛋白構型改變、回收有活性蛋白質等試驗。
4．電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。
5．提供具有3種不同pH的緩沖液套裝，便于客戶選擇zuì適合的緩沖液體系。
產品組成：
| 成分 | 規格 |
| 丙烯酰胺干粉 | 60g |
| 甲叉雙丙烯酰胺干粉 | 3g |
| TEMED | 1.5ml |
| 過硫酸銨干粉 | 1g |
| 高中低緩沖液套裝選一 | ABC之一(見下) |
| 說明書 | 1份 |
| 高pH緩沖液套裝(只有BTN81212A有此成分) | |
| 高pH濃縮膠配膠液(pH6.7)，4× | 100ml |
| 高pH分離膠配膠液(pH8.9)，4× | 200ml |
| 高pH電泳液(pH8.3) | 10L(干粉) |
| 高pH上樣液，5× | 1ml |
| 中pH緩沖液套裝(只有BTN81212B有此成分) | |
| 中pH濃縮膠配膠液(pH5.5)，4× | 100ml |
| 中pH分離膠配膠液(pH7.5)，4× | 200ml |
| 中pH電泳液(pH7.0)干粉A | 55.2g |
| 中pH電泳液(pH7.0)干粉B | 10g |
| 中pH上樣液，5× | 1ml |
| 低pH緩沖液套裝(只有BTN81212C有此成分) | |
| 低pH濃縮膠配膠液(pH6.7)，4× | 100ml |
| 低pH分離膠配膠液(pH4.3)，4× | 200ml |
| 低pH電泳液(pH4.5) | 10L(干粉) |
| 低pH上樣液，5× | 1ml |
注：高、中和低pH緩沖液套裝里面均含100mL濃縮膠配膠液、200mL分離膠配膠液、10 L電泳液(干粉)和1mL上樣液，只是pH不同。
儲存條件：常溫運輸和保存(上樣液需-20℃保存)，保存期為一年。
使用方法：
如何選擇緩沖液?
高pH濃縮膠，高pH分離膠，高pH電泳液和高pH上樣液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。選擇適當pH的緩沖液(包括上樣液，電泳液，配膠液等)對蛋白質非變性PAGE非常重要，緩沖液的zuì佳pH又跟目的蛋白質的pI值密切相關。如果pH遠離pI，則蛋白質分子帶電多(電荷密度大)，電泳速度快，分辨率高。但過酸過堿又容易使蛋白質結構變性，失去活性，所以zuì佳pH條件就是在電泳分辨率和維持活性之間尋找平衡，需要針對每種蛋白質進行摸索或通過滴定曲線來確定，沒有通用的電泳緩沖體系。由于有近半數的蛋白質pI在4-6.5，所以在不知道目標蛋白的pI時，可以先選用高pH緩沖系統。
一、配制分離膠
1．確定濃度。對分子量在100Kd以上的蛋白質，可選用3-5%的膠；對分子量在20-150KD之間的蛋白質，可選用5-10%的膠；對分子量在10-80KD之間的蛋白質，可選用10-15%的膠。對未知樣品，建議使用7.5%的膠。
2．配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1克過硫酸銨干粉加1mL去離子水的比例配制10%的APS溶液，該溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19:1)溶液:在本產品提供的裝有60克丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自備的去離子水和3g甲叉雙丙烯酰胺,充分搖晃直到溶解(約需10-20分鐘)即得200mL 30%丙烯酰胺(19:1)溶液。此溶液zuì好在一個月內用完，必須4℃避光保存。
4．配10mL分離膠(如果配制其他體積,請按比例調節各成分用量):在一個25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去離子水、3.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分離膠配膠液。
5．搖晃混勻后抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應，不去除的話將影響丙烯酰胺聚合反應)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(這是配制10mL膠的用量，配制更大體積的膠則按比例增加)，迅速搖勻后倒膠。注意：如果購買的是低pH緩沖系統，由于在低pH緩沖液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述兩成分的用量。
7．在膠面距離頂部1-1.5 cm的時候停止灌膠。然后覆蓋一層1-5 mm厚的水，使膠頂部液面平整。由于比重不同，水和丙烯酰胺溶液不會混合。
8．室溫聚合30-60分鐘后，用1×分離膠配膠液洗滌凝固的膠的頂部，待用。
二、配制濃縮膠(濃縮膠可以提高分辨率，適合于成分復雜的樣品，一般使用濃度為4%。使用濃縮膠時蛋白質泳動速度主要跟其尺寸和形狀相關。因濃縮膠pH跟分離膠pH不同，蛋白質可能會發生聚合和沉淀。對成分單一的樣品，可以不用濃縮膠，此時蛋白的泳動速度主要跟其電荷密度，尺寸和形狀相關。)
1．配10mL濃縮膠(如果配制其他體積,請按比例調節各成分用量):在一個25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去離子水、1.3mL 30%丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×濃縮配膠液。
2．搖晃混勻后抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應，不去除將影響丙烯酰胺聚合反應)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(這是配制10mL膠的用量，配制更大體積的膠則用量需按比例增加)，迅速搖勻后在已經凝固的分離膠上倒膠。
4．在液面達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
5．室溫聚合30-60分鐘，拔出梳子，用1×電泳液沖洗加樣孔。
三、電泳
1．將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽加入足夠1×電泳液。注：本產品提供10升的三種不同pH的電泳液干粉中的一種，低PH和高PH值電泳液用前需將所有干粉溶解在1 L水中得10×電泳液，可以室溫放置，用時再稀釋成1×電泳液。一般不需要再調節pH，但保險起見，可以用pH試紙測試一下1×電泳液。高中低pH電泳緩沖液的pH分別是8.3，7.0和4.5。
注意：中pH值的電泳液干粉只能配1x電泳液，否則不溶解。稱取中pH電泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH電泳液(pH7.0)干粉B 1g混勻，加去離子水至徹底溶解，調PH7.0，定容至1L。客戶根據可實際需要量按比例增減。
2．連接電。如果濃縮膠和分離膠的pH高于目標蛋白pI，目標蛋白將帶負電荷并向陽移動，可以按標準的SDS-PAGE方法接通電(上陰下陽)；如果濃縮膠和分離膠pH低于目標蛋白pI，目標蛋白將帶正電荷并向陰級移動，此時應該下陰上陽。
3．300V預電泳直到電流不再降低(約需要30分鐘)以去除殘留過硫酸銨。
4．換電泳液。
5．在液體蛋白質樣品中加入5×上樣液(16μl液體樣品加4μL上樣液)后上樣。0.75 mm厚的膠可以上10μl，1.5 mm厚的膠可以上20μl。在未用加樣孔中也要加1×上樣液以防有樣品的空道的樣品擴散。注意：如果用考染檢測，每個孔的蛋白zuì好在50-100μg總蛋白，如果銀染則只需要1ug即可。樣品如果是蛋白質沉淀，可用1×上樣液直接溶解蛋白質沉淀后再上樣。蛋白質溶液或沉淀中不能含有能夠改變上樣液pH的殘留成分(如蛋白質沉淀劑TCA)，用前zuì好用pH試紙測試一下，不在上樣液的pH范圍時就用酸或堿調到正常范圍。大量樣品可用透析法調pH。
6．上樣自備的天然PAGE蛋白質標準或等電電泳的標準品(如果有的話)。
7．用15 mA(對0.75 mm厚的膠)或30mM(對1.5mm厚的膠)的電流電泳直到染料移動到分離膠底部。微型膠一般需要1-2小時。注意：電泳過程zuì好在冷室或有冷卻系統，以免電泳產熱使蛋白質變性。
8．終止電泳，取出凝膠進行后續的實驗處理(如染色或酶活性檢測)。
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