Y16581 肽酶

產品簡介
北京百奧萊博供應的肽酶用于科研試驗,本產品質量好,且具價格,深為用戶稱道,了解更多肽酶等蛋白類產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括肽酶在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:肽酶
英文名稱:Peptidase
產品貨號:Y16581
產品規格:5g|25g
CAS:9031-96-3
介紹:本產品是一種單一的外切酶,肽酶在生物學、醫學研究和生物技術方面是非常重要的一種酶。一類催化從肽鏈末端順序切開肽鍵和釋放出游離氨基酸的酶。作用于游離氨基端的稱為氨肽酶,作用于游離羧基端的稱為羧肽酶。本品屬于氨肽酶。
活力:≥2000u/g
儲存條件:2~8℃
外觀:固體粉末
用途:將多肽水解成氨基酸。肽酶在實驗室也被廣泛用作抑制蛋白試劑,并制造多肽所需的蛋白序列。更近期的實驗使用肽酶的抑制特異性處理重組融合蛋白。
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名稱:羅丹明標記鬼筆環肽
貨號:QN0267
規格:300T
本品為TRITC標記的鬼筆環肽,染色反應特異性強,對比性高,具有比Actin抗體更好的染色效果,適合用作F-actin的定性和定量檢測。另外,經本品結合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。且本品的結合沒有物種差異性,適用性廣泛。
別名:羅丹明鬼筆環肽
分子式:C60H70N12O13S2
分子量:1231.4
性狀:紫色粉末(凍干粉)
鬼筆環肽(Phalloidin)是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏的環狀七肽毒素,以高親和力(Kd= 20 nM)選擇性結合于絲狀肌動蛋白F-actin,而不會與單體肌動蛋白G-actin結合,通常用來標記組織切片,細胞培養物或無細胞體系中的F-actin,從而對F-actin進行定性和定量分析。另外,鬼筆環肽衍生物也以相近的親和力結合于大小纖維,無論是動植物來源的肌肉細胞或非肌肉細胞,按照每一個肌動蛋白亞基約與一個鬼筆環肽分子的計量比結合。且非特異性結合幾乎可忽略,染色區域和非染色區域辨識度非常明顯。因此,鬼筆環肽衍生物特別適合替代肌動蛋白(Actin)抗體進行相關研究。另外鬼筆環肽衍生物很小,直徑約12-15?,分子量<2000 Daltons,未標記肌動蛋白(Actin)的許多生理特性都得以維持,比如,同肌動蛋白結合蛋白如肌球蛋白,原肌球蛋白,DNase I等仍能發生反應;鬼筆環肽標記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質;以及甘油抽提的肌纖維標記后仍可收縮等。
鬼筆環肽(Phalloidin)的結合阻止絲狀肌動蛋白(微絲)的解離,穩定微絲結構,從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發生的臨界濃度(CC)降至<1μg/mL,因此,可用作一種聚合促進劑。此外,鬼筆環肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
1. 工作液準備
本品以溶于甲醇的 20μM 儲存液形式提供,總量為 300μl。按照 100 nM 的工作液濃度來換算,可制備總量為 60ml 的工作液。建議收到產品后,根據單次使用量,對母液進行小量分裝,-20℃避光凍存,一年穩定。開始實 驗前,使用 1×PBS 緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。推薦工作濃度為:80~200nM。現配現用。
2. 染色步驟
1) 細胞爬片生長 24h,使其密度達到 50%匯合度。
2) 吸掉培養液,37℃預熱的 1×PBS(pH 7.4)清洗細胞 2 次。
3) 使用溶于 PBS 的 4%甲醛溶液進行細胞固定,室溫固定 10min。 注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。
4) 室溫條件下,用 PBS 清洗細胞 2~3 次,每次 10min。
5) 室溫條件下,用丙酮(≤-20℃)脫水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化處理 5min。
6) 室溫條件下,用 PBS 清洗細胞 2~3 次,每次 10min。
7) 取 200μl 配制好的 TRITC 標記鬼筆環肽工作液,覆蓋住蓋玻片上的細胞,室溫避光孵育 30min(通常情況下, 4℃~37℃孵育皆可)。 注意:為了降低背景,可于 TRITC 標記的鬼筆環肽工作液內加入 1% BSA;另外,孵育過程中為了避免溶液揮 發,可將蓋玻片轉移到一個密封的容器內。
8) 用 PBS 清洗蓋玻片 3 次,每次 5min。
9) 使用 200μl DAPI 溶液(濃度:100 nM)對細胞核進行復染,約 30s。
10) 用 PBS 清洗蓋玻片,然后倒置在已經滴有一滴 Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫 掉多余封片劑,然后用指甲油封片。此法制備的標本玻片可置于 4℃避光保存,通常 6 個月內可繼續做 F-actin 染色分析。 注意:也可以直接使用含有 DAPI 的抗熒光淬滅封片劑合并步驟 9)10),簡化步驟。
11) 熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,選擇 TRITC 激發/發射濾片(Ex/Em=540/570nm)和 DAPI 激 發/發射濾片(Ex/Em=364/454nm)。
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