Y13303 低熔點(diǎn)瓊脂糖
- 產(chǎn)品/服務(wù)：Y13303 低熔點(diǎn)瓊脂糖
- 型 號(hào)：Y13303
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-05-25
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：986
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
低熔點(diǎn)瓊脂糖由專(zhuān)業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研目的，我公司的低熔點(diǎn)瓊脂糖品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶(hù)訂購(gòu)。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括低熔點(diǎn)瓊脂糖在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱(chēng)：低熔點(diǎn)瓊脂糖
英文名稱(chēng)：Agarose(Low melting gel)
產(chǎn)品貨號(hào)：Y13303
產(chǎn)品規(guī)格：5g
CAS：9012-36-6
分子式：C12H18O9
分子量：306.26
儲(chǔ)存條件：RT
用途：脫氧核糖核酸（DNA），脂蛋白和免疫電泳用。生化研究免疫擴(kuò)散等的底物。生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和微生物學(xué)研究。臨床醫(yī)學(xué)上用于乙型
敏感性：易吸潮
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| 貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
| QN3989 | CM-葡聚糖凝膠C-25 | 25g|100g |
| QN4047 | 硅膠(100～200目) | 500g |
| QN4065 | 谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P. | 10ml |
| QN4068 | 肝素-瓊脂糖凝膠6FF | 25ml |
| QN4081 | 葡聚糖凝膠G-150 | 25g|100g|500g |
| QN4083 | 瓊脂糖凝膠4FF | 100ml|500ml |
| QN4084 | 葡聚糖凝膠G-200 | 25g|100g|500g |
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名稱(chēng)：聚酰胺(30～60目)
貨號(hào)：QN3994
規(guī)格：500g
名稱(chēng)：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠4FF
貨號(hào)：QN4066
規(guī)格：10ml
pGEX載體表達(dá)的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合，因此可以通過(guò)谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。GSTs是一類(lèi)以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過(guò)形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對(duì)底物的親和力是亞毫摩爾級(jí)的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹(shù)脂對(duì)GST及其融合蛋白的純化效率很高。可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合GST融合蛋白。樹(shù)脂用3mol/L NaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對(duì)GST融合蛋白的結(jié)合能力很強(qiáng)（每毫升柱床體積的樹(shù)脂能結(jié)合8毫克融合蛋白）。
技術(shù)參數(shù)：
粒度：45～165μm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐壓：0.3Mpa
載量：＞10mg谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶
使用說(shuō)明：
一、谷胱甘肽樹(shù)脂的處理：
1．輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹(shù)脂的容器，將樹(shù)脂混成勻漿。
2．取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細(xì)菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
3．4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
4．在樹(shù)脂中加入10倍柱床體積預(yù)冷的PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
5．每毫升樹(shù)脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
二、制備細(xì)胞抽提物：
6．每100毫升培養(yǎng)物的細(xì)胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
7．加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8．用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強(qiáng)行注入黏稠的細(xì)胞裂解物中，劇烈振動(dòng)數(shù)次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動(dòng)溫育10分鐘，4℃ 3000g離心30分鐘，去除不溶性細(xì)胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
三、純化融合蛋白：
9．細(xì)胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹(shù)脂勻漿混和，每100毫升細(xì)菌培養(yǎng)物加2mL樹(shù)脂，于室溫輕搖30min。
10．混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11．沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹(shù)脂結(jié)合的蛋白。
12．4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13．重復(fù)步驟11和12兩次。
14．結(jié)合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動(dòng)10min，洗脫樹(shù)脂上結(jié)合的蛋白。
16．4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
17．重復(fù)步驟a和b兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結(jié)合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在結(jié)合了融合蛋白的樹(shù)脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據(jù)融合蛋白中的位點(diǎn)選擇），每mL樹(shù)脂加入50單位溶于1mL PBS的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩2～16小時(shí)。用小規(guī)模實(shí)驗(yàn)確定時(shí)間。
19．4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結(jié)合在樹(shù)脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。
試劑配制：
谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
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