SYA009 產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SYA009 產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測
- 型 號：SYA009
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-25
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1203
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應(yīng)的產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測用于科研試驗，產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測是我司眾多優(yōu)質(zhì)細菌PCR檢測試劑盒之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：產(chǎn)毒副溶血弧菌單重熒光PCR檢測試劑盒
英文名稱：Fluorescent PCR detection kit for Vibrio parahaemolyticus
產(chǎn)品貨號：SYA009
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒
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| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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名稱：志賀氏菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號：SYA003
規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
志賀氏菌屬(Shigella)是一類革蘭氏陰性桿菌，是人類細菌性痢疾zuì為常見的病原菌，通稱痢疾桿菌。人類及其它動物對志賀氏菌易感，10-200個細菌即可致病。本方法為熒光PCR檢測方法，反應(yīng)在同一管內(nèi)進行，操作簡單，并有效防止了污染，能對樣品中或預培養(yǎng)液中的志賀氏菌進行快速檢測，具有特異性高、敏感性強和操作簡便的特點。志賀氏菌的探針報告基團為FAM，淬滅基團為None。
二、用途：
該試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及食品中志賀氏菌的檢測。
三、試劑盒組成：(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
志賀氏菌熒光qPCR反應(yīng)液(Shig-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(Shig-PTC) 1管 50μL/管
四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。
五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
6.1.1 食品樣品：樣品采集與預培養(yǎng)參照《中華人民共和國標準 食品安家標準食品微生物學檢驗志賀氏菌檢驗(GB 4789.5-2012)》要求進行。
6.1.2 糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.3 病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。
6.2 DNA提取(用戶可根據(jù)需要選擇商業(yè)化DNA提取試劑盒)
6.2.1 培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
6.2.2 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
6.2.3 其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μl DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應(yīng)液(Shig-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 15μL N×15μL
向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(Shig-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。
八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(Shig-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
（3） 以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明Shig核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明Shig核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行Shig qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明Shig核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應(yīng)嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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