SYA083 腸出血性大腸桿菌
- 產品/服務：SYA083 腸出血性大腸桿菌
- 型 號：SYA083
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-25
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1132
產品簡介
北京百奧萊博供應的腸出血性大腸桿菌用于科研目的，我公司的腸出血性大腸桿菌品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括腸出血性大腸桿菌(O104:H4)單重熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：腸出血性大腸桿菌(O104:H4)單重熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA083
產品規格：48次/盒
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貨號：SYA072
規格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對副溶血性弧菌耐熱相關溶血素特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對副溶血性弧菌耐熱相關溶血素的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
二、用途：
該試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌耐熱相關溶血素(TRH)，用于副溶血性弧菌耐熱相關溶血素(TRH)感染的輔助診斷，其檢測結果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成：(48T)
| 組份 | 數量 | 規格 |
| TRH反應液(TRH-qPCR MIX) | 1管 | 672μL/管 |
| DNA抽提液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 陰性對照(NTC) | 1管 | 50μL/管 |
| TRH陽性對照(TRH -PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、熒光PCR 儀器適用范圍
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列，博日系列及其他熒光定量PCR 檢測儀。
五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6 個月。
六、樣品采集、前處理與DNA 提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便13000rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產的(DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)，并按照相應試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。
由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR 反應液(TRH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設所需要的PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
| 試劑 | 每個反應加入的量 | N個反應加入的量 |
| 熒光PCR反應液 | 14μL | N×14μL |
| 酶混合液 | 1μL | N×1μL |
| 總量 | 15μL | N×15μL |
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N 個PCR 反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(TRH-PTC)5μL，10000rpm 瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內。推薦循環條件：
| 1循環 | 50℃ for 2 min | |
| 預變性 | 1循環 | 95℃ for 10 min |
| PCR擴增 | 40循環 |
95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec |
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1)陰性對照(NTC)：不應產生任何的擴增曲線。
(2)陽性對照(TRH-PTC)：均產生擴增曲線。
(3)以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
(1)在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明副溶血性弧菌耐熱相關溶血素核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明副溶血性弧菌耐熱相關溶血素核酸陰性。
(3)如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行副溶血性弧菌耐熱相關溶血素qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明副溶血性弧菌耐熱相關溶血素核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項：
(1)初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA 酶。
(3)PCR 操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR 擴增區等)，防止實驗室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
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