羧基磁珠的品牌是百奧萊博，是優質的磁珠微球產品，本制品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于磁珠微球產品的研發、生產和供應，為您提供的羧基磁珠質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括羧基磁珠(5μm,10mg/ml)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：羧基磁珠(5μm,10mg/ml)
產品貨號：CZ028
產品規格：5ml/50ml

產品簡介：
Mag COOH系列磁珠具有超順磁性、快速磁響應性、豐富羧基官能團、單分散性和亞微米尺度粒徑等特點，能夠在特殊化學試劑(如EDC)的作用下將多肽、蛋白、寡聚核苷酸等生物配體共價偶聯到微球表面，是醫學與分子生物學研究中重要的載體工具。
COOH系列磁珠采用的高分子聚合技術將超順磁性材料和高分子材料地結合在一起，形成的一種功能化磁性微球。與傳統磁珠相比，Magrose具有更快的磁響應性，同時保持微球良好的分散性、低的非特異性吸附和更豐富的結合位點等特性，能便捷地與多種生物配體(蛋白、多肽、寡聚核苷酸、藥物分子等)進行高載量結合，可作為良好的基礎材料進行包被、吸附、化學改性等后續處理。
保質期：在2～8℃可穩定保存，保質期2年
產品：
1. 豐富的結合位點，加強與配體的特異性結合。
2. 超順磁性和高磁響應性，節省操作時間。
3. 良好的分散性和重懸性，提高操作的便捷性。
4. 良好的物理化學穩定性，保障重復性效果。
磁珠與生物分子的偶聯方法(參考，以蛋白A為例)：
A．磁珠表面羧基活化
1. 混勻磁珠后，取100 μL Mag/Magrose磁珠到1 mL離心管中，磁性分離去除上清液，用200 μL MEST溶液(100 mM MES，pH 5.0，0.05% Tween 20)進行磁性分離洗滌2次，然后移除上清液；
2. 迅速加入新鮮配制的 100 μL EDC溶液(10 mg/mL，以上述MEST溶液作分散劑)和100 μL NHS(10 mg/mL，以上述MEST溶液作分散劑)溶液到裝有磁珠的離心管中，漩渦混勻使磁珠充分懸浮， 25℃活化30 min，該期間保持磁珠的懸浮狀態(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；經過上述步驟之后，磁珠表面的羧基已經活化，可以與帶有伯氨基的生物配體進行共價偶聯。(活化狀態不宜長時間保存，建議立即進行偶聯)
B．磁珠與生物配體的共價偶聯
1. 磁性分離去除上清液，加入50 μg～200 μg生物配體(合適用量及濃度需要根據具體實驗進行優化，保持溶液pH≈8.0，可加入0.05% Tween 20以提高磁珠分散性，避免緩沖體系中存在除生物配體以外含有伯氨基的試劑)，輕柔地混勻；
2. 25℃偶聯2 h，或25℃偶聯1 h后放置4℃靜置過夜，偶聯期間保持磁珠的懸浮狀態(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；
3. 離心管置于磁性分離架上磁性分離去除上清液，加入200 μL PBST溶液(pH 7.2，且含1%BSA)重懸磁珠(可根據需要進行超聲)，25℃反應1 h封閉磁珠表面未反應的活化羧基基團，該期間保持磁珠的懸浮狀態(可利用垂直混合儀進行顛倒混勻)；
4. 離心管置于磁性分離器上磁性分離去除上清液，每次用200 μL PBS溶液(pH 7.2)或保存溶液洗滌3次后， 重新懸浮于保存溶液中(可根據需要來確定保存溶液的加入量，以調整偶聯配體磁珠的濃度)，保存于4℃。如果固定的生物配體穩定，可以在保存溶液中加入0.02%(w/v)疊氮化鈉(NaN3)作為抑菌劑。
注意事項：
1. 冷凍、干燥和離心等操作會引起磁珠團聚，不易于重懸和分散，并且影響磁珠表面功能基團的化學活性。
2. 在使用本產品前，請務必充分振蕩或超聲使磁珠保持均勻的懸浮狀態。
3. 使用過程中可根據需求，用純化水或緩沖液磁吸洗滌磁珠 2～3次，以去除保存液中乙醇。
4. 本產品需與磁性分離設備配套使用。
5. 為保證zuì佳的實驗結果，請選用合適的配體進行共價偶聯反應。
6. 本產品僅供研究使用。

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名稱：鎳離子螯和His-tag蛋白純化磁珠
貨號：CZ005
規格：5ml/2×50ml/4×250ml
產品簡介：
組氨酸標簽蛋白純化磁珠具有超順磁性，專為、快速純化組氨酸標簽蛋白而設計的一種功能化材料?？赏ㄟ^磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業領域便捷地進行組氨酸標簽蛋白純化。
與傳統層析方式使用的金屬螯合瓊脂糖預裝柱相比，采用磁珠純化組氨酸標簽蛋白，無需對樣品進行多次長時間的高速離心和濾膜過濾、無需控制流速、更無需高昂的層析設備。樣品與磁珠的特異性結合、洗滌以及目標蛋白的洗脫變得簡單、快速、易操作。對于熟練的操作者而言，在1 h內就能獲得高純度的目標蛋白，且能輕松實現高通量和大規模樣品的平行處理，為研究者節省了時間和成本。
本產品系列包括鎳離子(Nickel)、鈷離子(Cobalt)兩種金屬離子螯合磁珠，它們在目標蛋白結合量和非特異性吸附等性能上有所區別，用戶可根據目標蛋白與不同種類金屬的結合性能，以及對目標蛋白的產量和純度的要求，選擇不同種類的金屬離子螯合磁珠。具體產品信息及規格參考《產品特性》。
保質期 在2～8℃可穩定保存，保質期2年
注1：磁珠蛋白結合量與目標蛋白特性有關，此處僅做參考值
注2：1 mL 磁珠懸液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶劑耐受性請參考附錄信息
適用范圍：
適用于純化細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等分泌或胞內表達的可溶性組氨酸標簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化(包涵體需變性后再進行純化)。
操作流程：
1. 緩沖液的準備
目標蛋白與組氨酸標簽蛋白純化磁珠的結合性能將直接影響目標蛋白的純化效率，而各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標蛋白的回收率和純度。因此，在較大規模蛋白純化之前，用戶應該自行設計實驗，篩選出適合純化目標蛋白的緩沖液體系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑濃度進行洗脫是組氨酸標簽純化磁珠zuì常用的洗脫方法，次使用時，在不確定zuì佳的洗脫咪唑濃度情況下，推薦在緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，濃度從低到高分別洗脫，磁吸后收集蛋白上清液，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。
以下提供的緩沖液體系適用于多數組氨酸標簽蛋白的純化，供用戶參考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 樣品處理
本說明書提供以下三種樣品的處理方法：
(1)大腸桿菌、酵母等細胞內表達蛋白：表達細胞用適量的Binding Buffer稀釋，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，重懸細胞，冰浴超聲裂解細胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據需要在粗樣品中加入適量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用戶也可以根據實際需要對蛋白樣品進行離心操作。
(2)胞外表達蛋白：取胞外表達上清，用等量Binding Buffer稀釋，即為粗蛋白樣品。
(3)動物細胞胞內表達蛋白：取適量動物細胞，先用適量PBS洗滌1次，棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重懸，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即為粗蛋白樣品。
3. 磁珠預處理
一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據目標蛋白產量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達某目標蛋白，500 mL發酵液收獲2 g濕重的菌體，通過預實驗估算其目標蛋白產量為10～20 mg，用戶需要取5 mL磁珠懸液用于目標蛋白的純化。以下即以此為例進行詳細說明：
(1)將磁珠產品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取5 mL磁珠懸液于15 mL離心管中，進行磁性分離*，棄上清液，從磁性分離器上取下離心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述裝有磁珠的離心管中，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸??；進行磁性分離，移去上清液。重復洗滌2次。
(注*：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉數次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。)
4. 目標蛋白與磁珠結合
(1)用10 mL Binding Buffer懸浮2 g濕重的菌體，進行破碎和裂解之后，即為目標粗蛋白樣品，加入到裝有預處理磁珠的離心管中，將離心管置于漩渦混勻器振蕩15 s。
(2)將離心管置于旋轉混合儀上，室溫旋轉混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低溫環境下，旋轉混1 h，防止目標蛋白降解)。
(3)將離心管置于磁性分離器上進行磁性分離，移出上清液至新的離心管中以備后續檢測，從磁性分離器上取下離心管進行后續洗滌步驟。
5. 磁珠洗滌
(1)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管中，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測。重復此步驟1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉移到新的離心管(避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標蛋白)，磁性分離，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目標蛋白洗脫
(1)用戶可根據需要改變洗脫體積調整目標蛋白濃度，加入2～10 mL Elution Buffer，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標蛋白樣品。
(2)如果需要，可以重復上述步驟1次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否洗脫完全。
7. 磁珠后處理
(1)在裝有磁珠的離心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)重復上述步驟2次。
(3)在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(4)重復上述步驟2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同種蛋白的純化。
8. 磁珠再生
磁珠連續使用三次以上，其結合目標蛋白的能力可能會明顯降低，建議進行磁珠再生處理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可選)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(該化學試劑有一定的毒性，可能造成過敏反應，使用時務必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠懸液為例，詳細說明磁珠再生操作：
(1)將磁珠懸液進行磁性分離，去除上清液，從磁性分離器上取下離心管，在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。重復此步驟1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液，重復此步驟2次。
(4)堿處理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復 ddH2O洗滌步驟3～5次，至洗滌液呈中性為止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合20 min，磁性分離，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復此步驟4次以上，保證鎳離子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)。
蛋白純化流程的優化：
以上操作流程適用于大部分組氨酸標簽蛋白的純化，根據目標蛋白與金屬離子螯合磁珠的結合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優化，以提高目標蛋白的回收率和純度。
提高目標蛋白回收率的參考方法：
(1)降低樣品溶液和Binding Buffer中的Imidazole濃度；
(2)樣品溶液和其它緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延長蛋白與磁珠孵育的時間；
(6)延長洗脫目標蛋白的時間或增加洗脫次數。
提高目標蛋白純度的參考方法：
(1)提高樣品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的濃度；
(2)樣品和緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)延長洗滌的時間，增加洗滌次數；
(5)采用梯度Imidazole濃度洗脫目標蛋白。
注意事項：
1. 次使用本產品前，請務必詳細閱讀本說明書；
2. 磁珠使用和保存過程中應避免冷凍、干燥和高速離心等操作；
3. 在使用本產品前，請務必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態；
4. 請選用質量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發生滲漏引起磁珠的損耗；
5. 磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉離心管重懸磁珠，可采用移液器反復吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；
6. 用戶可根據實際需要保留經磁性分離移去的上清液，進行取樣檢測，以便分析純化過程和優化蛋白純化流程；
7. 本產品可以重復使用，當純化性能降低時，建議進行再生處理；
8. 使用過的磁珠重復使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠；
9. 本產品需與磁性分離器配套使用；
10. 本產品僅供研究使用。

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貨號	名稱	規格
CZ005	鎳離子螯和His-tag蛋白純化磁珠	5ml/2×50ml/4×250ml
CZ006	鈷離子螯和His-tag蛋白純化磁珠	5ml/2×50ml/4×250ml
CZ014	DEAE陰離子交換磁珠	5ml/100ml/1000ml
CZ016	1μm鏈霉親和素磁珠	1ml/10ml/100ml
CZ017	2μm鏈霉親和素磁珠	1ml/10ml/100ml
CZ022	羥基磁珠(500nm,10mg/ml)	5ml/50ml

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