BTN11-370 百日咳桿菌PCR檢測試劑盒
- 產(chǎn)品/服務：BTN11-370 百日咳桿菌PCR檢測試劑盒
- 型 號：BTN11-370
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-23
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1181
產(chǎn)品簡介
百日咳桿菌PCR檢測試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要百日咳桿菌PCR檢測試劑盒等細菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括百日咳桿菌PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：百日咳桿菌PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：BTN11-370
產(chǎn)品規(guī)格：50次
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一、簡介
本試劑盒用一對幽門螺旋桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術對幽門螺旋桿菌核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
二、用途
該試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的幽門螺旋桿菌，用于幽門螺旋桿菌(HP)的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
HP反應液(HP-qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
HP陽性對照(HP-PTC) 1管 50μL/管
四、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。
六、樣品采集、前處理與DNA提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便1300rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
6.3.1液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
6.3.2固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
6.3.3 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
6.3.4 其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
注：建議采用相關標準方法進行前增菌，并按照6.3.1方法進行提取。陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(HP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合液 1μL N×1μL
總量 15μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(HP-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
八、結(jié)果分析
8.1 結(jié)果分析條件設定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(HP-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明幽門螺旋桿菌核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明幽門螺旋桿菌核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行幽門螺旋桿菌qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明幽門螺旋桿菌核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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