WH0155 高通量96孔板高純度質粒提取試劑

產品簡介
高通量96孔板高純度質粒提取試劑由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持,本品用于生化實驗研究等領域,我公司專注于DNA提取純化產品的研發、生產和供應,為您提供的高通量96孔板高純度質粒提取試劑質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括高通量96孔板高純度質粒提取試劑盒(特異性吸附板法)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:高通量96孔板高純度質粒提取試劑盒(特異性吸附板法)
英文名稱:96wells High-purified Plasmid Extraction Kit
產品貨號:WH0155
產品規格:4×96孔|24×96孔板
本試劑盒的96孔吸附板的膜采用了我公司硅基質材料,能夠、專一的吸附質粒DNA,zuì大限度去除蛋白及其他雜質,從而保證提取質粒的純度。每孔zuì多處理1.3ml高拷貝質粒菌液,從中可快速提取多至5-10μg質粒DNA(產量與質粒拷貝數、細菌狀態等因素有關)。使用該試劑盒提取的質粒DNA可用于限制性酶切、測序、文庫篩選,連接和轉化等分子生物學實驗。
產品特點:
·提取速度快。
·配備了獨特的BaiRed試劑,可以清晰辨明抽提過程中樣本的裂解程度,確保得到率、高純度的質粒DNA。
·純度高:可直接用于下游實驗。
·可用于高通量自動化核酸提取工作站。
提取實例:

使用本試劑盒處理1ml過夜培養的大腸桿菌(0)菌液(LB培養基),平均得到5~6μg的高純度pBS質粒。
| 組分 | 4板 | 24板 |
| 平衡液BL | 240ml | 3×500ml |
| 溶液P1 | 125ml | 3×240ml |
| 溶液P2 | 125ml | 3×240ml |
| 溶液P3 | 160ml | 4×250ml |
| 去蛋白液PD | 240ml | 3×500ml |
| 漂洗液PW | 3×50ml | 2×500ml |
| 洗脫緩沖液TB | 60ml | 240ml |
| BaiRed | 700μl | 4×1ml |
| RNaseA(10mg/ml) | 1.25ml | 6×1.25ml |
| 半裙邊96孔吸附板CP3 | 4個 | 24個 |
| 半裙邊96孔過濾板 | 4個 | 24個 |
| 96孔深孔板 | 16個 | 96個 |
| 250ml試劑瓶 | - | 1個 |
| 封口膜 | 16張 | 96張 |
| 透氣膜 | 5張 | 25張 |
儲存條件:室溫(15-25℃)干燥條件下,可保存12個月,更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下,若溶液產生沉淀,使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間,必要時可在37℃水浴中預熱10min,以溶解沉淀。溶液P1加入RNase A后,應置于2-8℃保存,可穩定保存12個月。單獨包裝的RNase A可在室溫保存12個月。
注意事項:請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項。
1.96孔板細菌培養方法:將含相應抗生素的培養基加入96孔深孔板中,每孔添加1.0-1.3ml培養基且挑取單克隆搖菌,加蓋透氣膜封板以防污染,在220-280rpm 37℃條件下培養20-24h。
2.溶液P1使用前先加入RNase A (請分批配制,每125 ml P1加入1.25 ml RNase A (10mg/ml),可用于4板提取反應),混勻,置于2-8℃保存。
3.每次使用前取50 ml漂洗液PW并加入200 ml無水乙醇搖勻后使用。
4.使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P3是否出現渾濁,如有混濁現象,可置于37℃水浴中加熱幾分鐘,即可恢復澄清。溶液P2和P3使用后應立即蓋緊蓋子。
5.所有離心步驟均為室溫下進行離心。
6.提取的質粒量與細菌的培養濃度、宿主菌、質粒拷貝數等因素有關。
7.實驗前使用平衡液處理吸附板,可以zuì大限度激活硅基質膜,提高得率。
8.用平衡液處理過的吸附板zuì好當天使用,放置時間過長會影響提取效果。
BaiRed使用方法:
BaiRed是一種顏色指示劑,用以指示整個操作的正確性,不影響任何下游實驗且對人體無害。為可選試劑,客戶根據需求選擇是否添加。
使用方法:若選擇添加,則在使用之前按BaiRed:P1=1:200進行添加,顛倒混勻至完全勻相。在使用時添加BaiRed的P1溶液為紅色;添加P2之后紅色完全變為紫色說明充分裂解;再添加P3溶液之后勻相狀態為黃色說明中和復性充分。
操作步驟:(離心法)
1.平衡96孔吸附板:將96孔吸附板CP3和96孔深孔板疊放在一起,向吸附板中每孔加入500μl的平衡液BL,3,600 rpm(~2,130×g)離心3 min,倒掉深孔板中的廢液,將吸附板重新放在深孔板上。(請使用當天處理過的吸附板)。
2.集菌步驟:向一個新的96孔深孔板中添加1.0-1.3ml搖好的菌液(或者取搖好菌液的96孔板),加蓋封口膜,3,600 rpm(~2,130×g)離心10min收集菌體,倒掉培養基,倒扣于吸水紙上除去殘留的培養基(如果菌體濃度較低,可以重復集菌一次)。
3.向每孔收集好的細菌培養物中加入250 μl溶液P1 (請先檢查是否已加入RNase A),加蓋封口膜,使用漩渦混合器徹底懸浮菌體。
注意:若溶液P1添加BaiRed試劑,則此時為紅色。
4.揭去封口膜,向96孔深孔板中每孔加入250 μl溶液P2,加蓋新的封口膜,溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解,瞬時離心使封口膜上的水珠落回板中。
注意:溫和地混合,不要劇烈震蕩,以免打斷基因組DNA,若使用BaiRed試劑,完全混勻時顏色為紫色,若裂解不充分會有部分紅色殘留。混勻后菌液應變得清亮粘稠,所用時間不應超過5 min,以免質粒受到破壞。
5.揭去封口膜,向96孔深孔板中每孔加入350 μl溶液P3,加蓋新的封口膜,立即溫和地上下翻轉6-8次使其充分混勻。
注意:溶液P3加入后應立即混合,避免產生局部沉淀。若使用了BaiRed試劑,完全混勻應從紫色變為黃色。
6.將96孔過濾板和一個新的96孔深孔板疊放在一起,取750 μl上步得到的裂解溶液轉入對應的96孔過濾板中(過濾板的承載量為750 μl),3,600 rpm(~2,130×g)離心5 min。
7.將過濾液全部轉入第1步平衡好的96孔吸附板CP3中(96孔吸附板CP3疊放在收集廢液的96孔深孔板上),3,600 rpm(~2,130×g)離心5 min,倒掉深孔板中的廢液,將吸附板重新放在深孔板上。
8.可選步驟:向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD,3,600 rpm(~2,130×g)離心5min,倒掉深孔板中的廢液,將吸附板重新放在深孔板上。
注意:如果宿主菌是end A+宿主菌(TG1,BL21,HB101,JM系列等),這些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解質粒DNA,強烈推薦采用此步。
如果宿主菌是end A-宿主菌(DH5α,0等),這步可省略。
9.向96孔吸附板CP3每孔中加入700 μl漂洗液PW (請先檢查是否已加入無水乙醇),3,600 rpm(~2,130×g)離心5 min,倒掉收集板中的廢液。
10.重復操作步驟9。
11.將96孔吸附板CP3疊放在96孔深孔板上,置于3,600 rpm(~2,130×g)離心10min,目的是將吸附板中殘余的漂洗液去除。
注意:漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。
12.將吸附板CP3放入新的96孔深孔板中,使用排槍向96孔CP3吸附膜的中間部位懸空滴加80-100 μl洗脫緩沖液TB或ddH2O(pH≥7.5),室溫放置5-6min,3,600 rpm(~2,130×g)離心10min將質粒溶液收集到收集板中。
注意:通常100 μl的洗脫液在洗脫后能回收到平均55 μl的DNA產物。為增加核酸的得率,可以適當增加洗脫液的體積(比如采用120 μl洗脫液進行洗脫)。此外,洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低于7.0會降低洗脫效率;且DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。
操作步驟:(負壓法)
1.平衡96孔吸附板CP3:將96孔吸附板CP3放入負壓裝置中,每孔加入500μl的平衡液BL,開啟并調節負壓,抽掉吸附板中的溶液。(請使用當天處理過的吸附板)
2.以下步驟同(一)離心法中的第2-5步驟操作方法。
3.接(一)離心法第5步驟之后,將96孔過濾板和第1步平衡好的96孔吸附板CP3疊放后置于負壓裝備上,過濾板每一個孔需對應吸附板的每一個孔。
注意:此步操作應按照各種品牌的負壓裝置要求進行操作。
4.取上步得到的裂解溶液750 μl左右,轉入對應的96孔過濾板中(過濾板的承載量為750μl),調節負壓抽干溶液。
5.可選步驟:向吸附板CP3每孔中加入500μl去蛋白液PD,調節負壓抽干溶液。
注意:如果宿主菌是end A+宿主菌(TG1,BL21,HB101,JM系列等),這些宿主菌含有大量的核酸酶,易降解質粒DNA,強烈推薦采用此步。如果宿主菌是end A-宿主菌(DH5α,0等),這步可省略。
6.向96孔吸附板CP3每孔中加700 μl漂洗液PW,調節負壓抽干溶液。
7.重復步驟6。
8.使用zuì大負壓繼續抽10min,以徹底抽干吸附材料中殘余的漂洗液。若柱尾仍然含有水珠用吸水紙吸干即可。
9.將吸附板CP3放入一個新的96孔深孔板中,使用排槍向96孔CP3吸附膜的中間部位懸空滴加80-100 μl洗脫緩沖液TB或ddH20(pH≥7.5),室溫放置5-6 min,3,600 rpm(~2,130×g)離心10min將質粒溶液收集到深孔板中。
DNA濃度及純度檢測:
1.DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
2.DNA應在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約雙鏈DNA 50 μg/ml、單鏈DNA40 μg/ml。OD260/OD280比值應為1.7-1.9。
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名稱:柱式分枝桿菌DNA提取試劑盒
貨號:BTN70703
規格:50次
分枝桿菌屬(Mycobacterium)是為古老的細菌,與人類的疾病相關的就有25種以上,包括引起結核病的結核分枝桿菌(Mycobacteria tubercμLosis)。近年來由于多重耐藥性分枝桿菌的出現,分枝桿菌再次成為人們關心的細菌。PCR快速診斷是目前檢測分枝桿菌的主流方法,但由于此類細菌具有十分獨特的堅硬的細胞壁,快速提取其基因組DNA一直是十分棘手的技術問題。本產品就是為解決這一問題而開發。
試劑盒特點:
1. 操作簡單,客戶不需要準備額外的試劑。
2. PCR檢測靈敏度一般在10-100CFU/mL樣品。
3. 既可以使用培養的細菌,也可以使用痰液、精液、血液、腦脊液等樣品。
4. 價廉物美,與國外同類產品相比質量相當,但價格。
5. 安全,本試劑盒對人體無害,無腐蝕性和刺激性氣味。
試劑盒組成:
| 成分 | 規格 |
| 化痰液 | 100ml |
| 溶液A | 7.5ml |
| 溶液B | 15ml |
| 離心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脫液2.0 | 10ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。
使用方法:
注意:文獻報道部分分枝桿菌在DNA提取過程中還有形成菌落的能力,所以任何丟棄的溶液都必須按有傳染性的污染物品對待,并嚴格按有關部門要求進行消毒處理。
一:培養的分枝桿菌樣品的預處理
1. 刮取培養的分枝桿菌到0.5mL自備TE緩沖液中。
2. 80℃放置20分鐘以殺滅細菌。
3. 3000 g室溫離心15分鐘,棄上清。
4.細菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
二:含分枝桿菌的痰液樣品的預處理
1. 將需要處理的痰液樣品加入到干凈的10mL或15mL塑料離心管中。
2. 加入等體積的化痰液,充分混合均勻后室溫放置15-30分鐘。如果痰很濃,可以延長保溫時間。
3. 3000 g室溫離心15分鐘,棄上清。
4.細菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
三:含分枝桿菌的血液樣品的預處理
1. 用自備紅細胞裂解液對血液進行紅細胞裂解處理,具體操作見百奧萊博紅細胞裂解液(BTN60403)使用手冊。
2. 將得到的白細胞沉淀-20℃或更低溫度放置10分鐘。
3. 迅速將得到的白細胞沉淀100℃加熱10分鐘。
4.上述處理將使大部分白細胞破裂,加入自備的TE或PBS緩沖液,直到離心管體積的一半位置。此步使白細胞的DNA進入緩沖液中。
5.離心5-10分鐘沉淀細菌,離心速度取決于離心管的大小。如果樣品在1.5mL離心管,則可以12000~15000g室溫離心。如果樣品在10-15mL離心管,則3000-5000g室溫離心。
6. 吸棄上清(含白細胞DNA)后所得細菌沉淀可以放-20℃冰箱備用或直接進入細菌基因組DNA提取步驟。
四:細菌基因組DNA的提取
1. 將150μl 65℃預熱過的溶液A加到有細菌沉淀的離心管中,充分震蕩混勻。
2. 將細菌和溶液A的混合物轉移到一個干凈的1.5mL塑料螺旋蓋離心管中。強烈建議不要使用壓蓋式塑料離心管,否則后面處理過程中溶液容易漏出。
3. 加入300μl溶液B和300μl自備lǜ仿,充分震蕩混勻。
4. -20℃放置直到液體凝固,一般需要20-60分鐘。過夜放置也可。
5. 放室溫融化后振蕩半分鐘。
6. 12000~15000g室溫離心3~5分鐘,小心轉移上清到離心吸附柱中,室溫放置2分鐘。
7. 12000~15000g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
8. 加入0.5mL通用洗柱液 12000~15000g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
9. 重復第8步的洗滌過程一次。
10. 短暫離心半分鐘。此步不要省略,否則殘留的洗柱液(含乙醇)將會影響DNA電泳、酶切和PCR等反應。
11. 將離心吸附柱轉移到一新的離心管中,加入30-100μL DNA洗脫液2.0,12000~15000g室溫離心半分鐘,所得溶液即基因組DNA。

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