BTN100205 一站式DNA非變性PAGE電泳套
- 產品/服務：BTN100205 一站式DNA非變性PAGE電泳套
- 型 號：BTN100205
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-23
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1019
產品簡介
一站式DNA非變性PAGE電泳套的品牌是百奧萊博，是優質的核酸電泳和回收產品，本制品用于生化實驗研究等領域，一站式DNA非變性PAGE電泳套是我司眾多優質核酸電泳和回收之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括一站式DNA非變性PAGE電泳套裝在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：一站式DNA非變性PAGE電泳套裝
英文名稱：One-Stop DNA Native PAGE Pack
產品貨號：BTN100205
產品規格：30次
本品就是專門用于非變性PAGE的試劑。非變性PAGE電泳是研究SSCP-PCR(single-strand co
產品特點：
1.一站式，用戶只需要準備水和樣品，十分方便。
2. 安全，免去了實驗人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。
3. 靈活，高濃度的丙烯酰胺溶液可用于配制各種濃度的PAGE膠，分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺可用于配制各種交聯度的PAGE膠。
4. PAGE電泳后可直接用于銀染等后續試驗。
產品組成：
| 成分 | 規格 | 保存 |
| 丙烯酰胺 | 60g | 室溫 |
| 甲叉雙丙烯酰胺 | 2g | 室溫 |
| TEMED | 1.5ml | 4℃，避光 |
| 過硫酸銨(干粉) | 1g | 室溫 |
| 非變性PAGE上樣液，2× | 1ml | 4℃ |
| 10×TBE(BTN90313) | 250ml | 室溫 |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：常溫運輸，保存條件見上表，有效期一年。
使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非變性PAGE電泳(其他應用請相應修改參數)
一、PAGE濃度的選擇：zuì好使用濃度為5-12%的丙烯酰胺膠，因為SSCP-PCR的擴增長度一般在150-200bp之間，而5%的PAGE的有效分辨范圍為80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范圍為60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范圍為40-200bp。
二、PAGE交聯度的選擇：交聯度越低，孔徑越大，對DNA分子構象的變化越靈敏，SSCP分辨率越高，但過低則膠太軟，不好進行電泳后的后續操作，所以一般選擇1-2%的交聯度(即丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺在49:1到48:2之間)。
三、體積的選擇：SSCP-PCR檢測需要長約30-40cm的測序膠板，可以結合梳子的厚度，計算膠的體積。
操作：
1. 配制PAGE膠(這是配制100mL膠的用量，配制更大體積的膠則需以此用量為基礎按比例增加)
A：新鮮配制10%的APS(過硫酸銨)：按每0.1克過硫酸銨干粉加1mL超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的1.5mL EP管中，搖晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鮮配制適當交聯度29:1的30%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本產品提供的裝有60 g丙烯酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自備的去離子水和全部的甲叉雙丙烯酰胺，充分搖晃直到溶解(約需10-20分鐘)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液zuì好在一個月內用完，必須4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE膠：在一個250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去離子水、30% AB溶液溶液和10×TBE緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有神經毒性，一定要戴手套操作。
| PAGE膠濃度 | 各成分用量(單位：ml) | 總體積(ml) | ||
| 去離子水 | 30%AB溶液 | 10×TBE緩沖液 | ||
| 5% | 73.4 | 16.6 | 10.0 | 100 |
| 6% | 70.0 | 20.0 | 10.0 | 100 |
| 7% | 66.7 | 23.3 | 10.0 | 100 |
| 8% | 63.3 | 26.7 | 10.0 | 100 |
| 9% | 60.0 | 30.0 | 10.0 | 100 |
| 10% | 56.7 | 33.3 | 10.0 | 100 |
| 11% | 53.3 | 36.7 | 10.0 | 100 |
| 12% | 50.0 | 40.0 | 10.0 | 100 |
注：有大量文獻報道PAGE膠中加入5%-10%的甘油能提高某些位點的分辨率。如果選擇加入10%的甘油，則減少去離子水的用量10mL，同時加入10mL甘油。
D：搖晃混勻。zuì好能抽真空10-15分鐘以去除溶液中的氧氣(氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應)，無條件也可以不脫氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速搖勻后倒膠。
F:在膠的液面距離達到頂部時停止灌膠，插入梳子。
G:室溫聚合30-60分鐘(低溫抑制聚合反應)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液沖洗加樣孔。
I: 放4℃冰箱預冷30分鐘-12小時。為了防止膠收縮，zuì好頂部加少量1×TBE緩沖液。預冷的膠有利于保持單鏈DNA的構型。
2. 將預冷的凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠1×TEB電泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR樣品，加入等體積2×非變性PAGE上樣液，85℃處理5分鐘后冰浴。用前短暫離心后取2μl上樣。
4.連接電源線，打開電源開關。如果PAGE中不含甘油，則使用25W的功率，電泳5-7小時(對3—40cm長的PAGE膠而言)。如果使用含甘油的PAGE，則使用8W的功率，電泳16-18小時。由于溫度變化過大會改變DNA構型，所以電泳時zuì好能保持恒溫。對不含甘油的PAGE，zuì好恒溫在4℃、對含甘油的PAGE，zuì好恒溫在25℃。
5. 終止電泳，取出凝膠進行后續的處理(如銀染)。
疑難解答：
一、為何SSCP-PCR帶型有復合條帶？
原因之一：可能是殘留的PCR引物跟單鏈的DNA結合形成遷移率不同的條帶。解決方法是稀釋PCR或電泳前將PCR產物進行純化。
原因之二：可能是PCR產物用量過高，彼此復性。解決辦法是將PCR產物稀釋后4-8倍后使用。
二、如何提高電泳分辨率？
可以在配膠時加入甘油(終濃度為5%-10%)，因為甘油是弱變性劑，能部分展開DNA折疊結構，增加表面積，增加電泳時位移差異。但加入甘油后粘性變大，電泳速度變慢，因此只適合室溫電泳使用，不要4℃電泳。如果條件允許，zuì好同時做加甘油和不加甘油的電泳實驗。
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| 貨號 | 名稱 | 規格 |
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名稱：超快核酸電泳液(干粉)
貨號：BTN51210
規格：50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基礎上開發的DNA/RNA 兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer一樣，能以高達30 V/cm的電壓電泳，達到快速電泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本產品對鹽離子濃度敏感度低，同時還能用于RNA電泳。
產品特點：
1.快速，電泳時間短，對分辨率要求不高的電泳(如PCR和酶切檢測等)甚至可以在5-10分鐘內完成。
2. 不影響后續的Southern雜交，DNA膠回收和DNA連接等反應。
3. 價格與TBE(干粉)相當甚至更。
4. DNA膠回收率高于使用TAE和TBE電泳的膠回收。
儲存條件：常溫保存和運輸，有效期兩年。
使用方法：
一：溶液的配制
將本產品全部加到一個干凈的容量適當的容器中，按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分鐘左右)。
配法一(配制20X濃縮液)：加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液
注：其他濃度的濃縮液配制可以按比例計算，但濃縮液濃度不能超過20×，否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未徹底混合均勻的成份，所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時間不用，zuì好滅菌后放4℃長期保存。
二：DNA電泳
將SuperBuffer-2濃縮液用蒸餾水稀釋到1×，除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結果外，操作跟使用TAE和TBE基本一樣。需注意的地方是：
1.電壓：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常規電壓，也可以使用較高電壓，只是使用常規電壓時，其快速的優越性就體現不出來。使用較高電壓時，由于各電泳槽結構不同，zuì佳電壓需要稍做摸索。次zuì好將工作電壓調到zuì高電壓的80%左右，即平均25 V/cm(電距離)。對一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分鐘；對大的電泳槽，可用400-450V 跑5-10分鐘。每次根據電泳結果和緩沖液溫度決定各電泳槽的zuì佳工作電壓和時間。一般電壓越高，電泳時間越短。若在電泳時發生電流或電壓逐漸下降的現象，請檢查電泳儀是否設置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數超過3次或緩沖液中有細菌/真菌生長也會出現此現象，需要更換新的緩沖液。
2.膠濃度：建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右，對于長度在100bp以下的DNA片段，可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會丟失水份，所以zuì好在溶膠后適當補充水份(可以前后稱重)，否則膠濃度會逐漸增加，DNA的移動速度會減低、產熱會增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節約膠的用量，另一方面可以使DNA的泳動速度更快，同時還能夠提高DNA的回收率。
3.染色：如果使用EB，zuì好把染料加入到融化后的凝膠中(只是EB的終濃度zuì好為0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE時稍高)，但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用百奧萊博低毒染料綠如藍，zuì好將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料，則長時間電泳后(超過20分鐘)，大部分染料在高壓下會與DNA 分離，DNA 條帶可能會看不見或看起來很淡，此時應該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(終濃度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2與SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以結合使用。
4. DNA 條帶扭曲：DNA樣品中所含SDS 量過高時(SDS 主要來于上樣液)，DNA條帶將出現扭曲，影響實驗效果。建議使用不含SDS的上樣液。
5. 反復使用：1×SuperBuffer-2電泳液至少可以重復使用2-3次，如果使用大電泳槽，可以重復使用的次數會更多。
6. TAE和TBE膠：已經用TAE和TBE電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1× SuperBuffer-2電泳液中按上述電泳條件電泳，但有時候會有扭曲現象。
三：RNA電泳
跟DNA電泳一樣，必須在使用前用水將SuperBuffer-2溶液稀釋到1×，其使用方法跟DNA電泳的主要區別是：
1.電壓：RNA電泳時，zuì高使用電壓大約只有DNA zuì高使用電壓的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的電壓。由于各實驗室電泳槽規格各異，次電泳時，zuì好將工作電壓調到跟MOPS電泳一樣的電壓，每次再逐漸往上調電壓和時間，根據電泳結果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。
2. RNA上樣液：RNA必須與含變性劑的RNA上樣液混合，并在80℃保溫10分鐘后冰浴2-5分鐘再上樣。不能直接將RNA樣品上樣或使用DNA上樣液，否則電泳不但很難得到清晰的條帶，并且在加樣孔中還會有看似DNA污染的條帶出現。推薦使用百奧萊博生產的RNA變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.膠濃度：RNA電泳zuì好使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠，用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色：同DNA電泳。
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