SYA044 肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑
- 產(chǎn)品/服務：SYA044 肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑
- 型 號：SYA044
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1049
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應的肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑用于科研試驗，肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑是我司眾多優(yōu)質(zhì)細菌PCR檢測試劑盒之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：肺炎鏈球菌單重熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA044
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒
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規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對副溶血性弧菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對副溶血性弧菌核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
二、用途：
該試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌，用于副溶血性弧菌(VP)感染的輔助診斷，其檢測結果僅供臨床參考。
三、試劑盒組成：(48T)
| 組份 | 數(shù)量 | 規(guī)格 |
| VP反應液(VP-qPCR MIX) | 1管 | 1mL/管 |
| 核酸提取液(DNA Extraction) | 2管 | 1.5mL/管 |
| 酶混合物(Enzymes MIX) | 1管 | 48μL/管 |
| 陰性對照(NTC) | 1管 | 250μL/管 |
| VP陽性對照(VP-PTC) | 1管 | 50μL/管 |
四、
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為12個月。
六、樣品采集、前處理與DNA提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便13000rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
6.3.1 對上述處理好的樣本加入等體積的核酸提取液(固體標本加入50uL核酸提取液)，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商業(yè)化DNA提取試劑盒。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取4μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(VP-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
| 試劑 | 每個反應加入的量 | N個反應加入的量 |
| 熒光PCR反應液 | 20μL | N×20μL |
| 酶混合液 | 1μL | N×1μL |
| 總量 | 21μL | N×21μL |
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入21μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(VP-PTC)4μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：
| 預變性 | 1循環(huán) | 94℃ for 2 min |
| PCR擴增 | 40循環(huán) |
94℃ for 15 sec 55℃ for 30 sec |
在55℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
八、結果分析：
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1）陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
（2）陽性對照(VP-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
（3）以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1）在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明副溶血性弧菌核酸陽性。
（2）Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明副溶血性弧菌核酸陰性。
（3）如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4）對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行副溶血性弧菌qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明副溶血性弧菌核酸陽性；否則判為樣本陰性。
九、注意事項：
（1）初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2）所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3）PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4）樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5）盒內(nèi)所有物品應視為污染物對待，按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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