BTN160903 可調式易錯PCR試劑盒
- 產(chǎn)品/服務：BTN160903 可調式易錯PCR試劑盒
- 型 號：BTN160903
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-06
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：918
產(chǎn)品簡介
北京百奧萊博供應的可調式易錯PCR試劑盒用于生化實驗研究等領域，可調式易錯PCR試劑盒是我司眾多優(yōu)質核酸擴增(PCR)之一，質量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括可調式易錯PCR試劑盒在內，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：可調式易錯PCR試劑盒
英文名稱：Co
產(chǎn)品貨號：BTN160903
產(chǎn)品規(guī)格：100次
易錯PCR是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對功能的特性，在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當?shù)倪x擇方法，則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯PCR和常規(guī)PCR的比較如下：
產(chǎn)品特點：
1. 即開即用，十分簡單方便，尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的優(yōu)越性。
2. 配方經(jīng)過精心優(yōu)化，實驗人員在一定范圍內可以控制突變率，一輪PCR的突變率范圍在2-8突變/1000bp，更高的突變率可以通過多輪PCR達到。
3.可用于連續(xù)易錯PCR，只需把上一次易錯PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
4.可以擴增的DNA片段更長，達到3kb，對于3kb以上的產(chǎn)物，建議分段擴增。
試劑盒組成：
| 成分 | 規(guī)格 |
| Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
| 易錯PCR專用dNTP 2.0,10× | 300μl |
| 易錯PCR Mix 2.0,10× | 300μl |
| 易錯PCR專用MnCl2 | 300μl |
| 易錯PCR專用dGTP | 300μl |
| 超純水 | 1ml |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期為一年。
使用方法：
1. 將模板DNA稀釋到1ng/uL。將引物稀釋到10uM。
注意：引物是決定易錯PCR成敗的關鍵因素，設計引物時要保證其Tm在70℃，長度在25-30nt之間，GC含量在45%-60%之間，3端GC含量低，并且沒有發(fā)夾結構。
2. 根據(jù)每1000bp的預期突變數(shù)按下表確定易錯PCR的反應條件中MnCl2和dGTP的用量。表中的A表示易錯PCR專用的MnCl2，B表示易錯PCR專用的dGTP：
| 預期突變數(shù) | 2個 | 3個 | 4個 | 5個 | 6個 | 7個 | 8個 |
| A的用量(μl) | 0 | 1.0 | 2.5 | 4.0 | 4.0 | 4.0 | 4.0 |
| B的用量(μl) | 0 | 0 | 0 | 1.0 | 2.0 | 3.0 | 4.0 |
3.以30μL的標準PCR反應體系為例，如果反應體系不是30μL，各成分需要按等比例增加或減少。在一干凈的PCR管中，加入下列成分
注意：可以先計算出超純水的用量，優(yōu)先加水
| 成分 | 用量 |
| 超純水 | 根據(jù)第2步加 |
| 易錯PCR Mix,10× | 3μl |
| 易錯PCR 專用dNTP，10× | 3μl |
| 易錯PCR 專用MnCl2 | 根據(jù)上步 |
| 易錯PCR 專用dGTP | 根據(jù)上步 |
| 自備DNA模板(1ng/μl) | 1μl |
| 自備PCR引物(10μM each) | 1μl each |
| Taq DNA聚合酶(5U/μl) | 1μl |
4. 按已經(jīng)優(yōu)化的PCR條件進行一定循環(huán)數(shù)的PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關系見下表)，然后取5μL電泳檢查。如果沒有優(yōu)化的PCR條件，一般可以先嘗試下面的PCR條件(對1Kb長的模板而言)：
| PCR前變性 | 94℃ 3分鐘 |
| 易錯PCR(循環(huán)30次) | 94℃ 1分鐘 |
| 45℃ 1分鐘 | |
| 72℃ 1分鐘 |
注：易錯PCR一般不需要熱啟動，也不需要在PCR結束后做延伸處理。長度每增
加1Kb，時間延長1分鐘。易錯PCR循環(huán)次數(shù)決定每個核苷酸位置的突變幾率，進而決定每個PCR產(chǎn)物可能的突變位點數(shù)，所以所需循環(huán)數(shù)由客戶根據(jù)需要改動。
5.電泳檢測是否得到預計長度的PCR產(chǎn)物。
6. 克隆片段進行功能篩選、或者克隆后進行測序分析突變率、或者用此輪PCR的產(chǎn)物為模板，進行下一輪的易錯PCR。
疑難解答：
Q：現(xiàn)象：沒有PCR產(chǎn)物。
A：可能原因：一是引物沒有優(yōu)化，可以重新設計引物；二是模板DNA太少，可以增加用量；三是模板不純，zuì好先膠回收；四是溶解DNA的溶液中有EDTA，降低了PCR反應體系的Mg離子濃度，可以適當補加Mg離子。
Q：現(xiàn)象：太多的PCR條帶或PCR條帶模糊一片。
A：可能原因：一是PCR循環(huán)數(shù)太多；二是復性溫度太低；三是延伸時間太長；四是引物沒有優(yōu)化，可以重新設計引物；五是PCR條件沒優(yōu)化，可以使用touch-down PCR；六是模板有其他DNA污染；七是DNA模板質量不高或者濃度太高。
Q：如果需要更高的突變率，如何辦？
A：可以使用連續(xù)多次易錯PCR來提高突變率。但zuì好先用膠純化回收PCR片段,再用于下一輪易錯PCR。此外不能用少于千分之一的次PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯PCRzuì好使用所有第二輪的PCR產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL體系中完成(可以分成很多100μL體系進行)。
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