ALH611 長片段DNA超速PCR Mast
- 產品/服務：ALH611 長片段DNA超速PCR Mast
- 型 號：ALH611
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-06
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1095
產品簡介
北京百奧萊博供應的長片段DNA超速PCR MasterMix用于科研目的，我公司的長片段DNA超速PCR MasterMix品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括長片段DNA超速PCR MasterMix在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：長片段DNA超速PCR MasterMix
英文名稱：Fast & Long DNA PCR MasterMix
產品貨號：ALH611
產品規格：1ml|5ml
本品包含超速長片段DNA聚合酶、dNTPs和優化的反應緩沖液，濃度為2×。使用時只需加入模板、引物，并補足水至Mix終濃度為1×即可。本制品含紅色示蹤染料，不需添加上樣緩沖液即可直接上樣進行電泳；也可經過純化處理，以用于酶切、連接、熒光測序等后續操作。
產品特點：
1.超快的擴增速度：延伸速度可以達到5～10秒/kb，zuì短半小時完成PCR。
2.突出的長片段擴增能力：可以擴增高達10kb的長片段（包括人類基因組此類的復雜模板）。
3.良好保真性：保真度是taq的3～6倍以上。
4.強大擴增能力：產量高，對于一些有特殊結構的復雜模板和GC含量高模板有良好效果。
注意事項：
1.本系統擴增速度快，短片段或者簡單模板如質粒模板可以嘗試5秒/kb延伸速度并采用較少循環數以進一步縮短PCR時間。長片段(≥3kb)或者復雜模板產量較低可以采用15-20秒/kb延伸速度或者采用較多循環數。
2.本品產量較低時可嘗試采用較長的延伸時間(如20秒/kb）和循環數（如35個）可以提高PCR產物的產量。
3.對于GC含量很高的模板，短片段預變性和變性溫度可以提高到98℃和/或適當延長變性時間。長片段為了避免DNA損傷不應該提高變性溫度，應該適當延長預變性時間到5分鐘，變性時間可以適當提高5-10秒。
4.如果擴增模板GC含量高或者模板復雜擴增效果不佳時，可在反應混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，按照1%梯度增加摸索zuì佳濃度。或者加入甜菜堿至終濃度1～1.7M。并采用降落PCR（Touchdown PCR）
儲存條件：-20℃，有效期2年。
本制品別名：超速PCR MasterMix|大片段PCR MasterMix
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名稱：一步法逆轉錄實時熒光定量PCR試劑盒(低含量ROX校正染料)
貨號：WE0149
規格：100次
本試劑盒是采用探針法(TaqMan，Molecular Beacon等)進行一步法Real-Time RT-qPCR的專用試劑盒。使用本產品進行Real Time RT-qPCR反應時，逆轉錄和定量PCR在同一反應體系中進行，反應過程中無需添加試劑，無需打開管蓋，避免了污染的同時提高了實驗效率。本產品的檢測靈敏度高，熒光信號強，信噪比高，非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。其所包含的特殊緩沖系統能使逆轉錄酶與DNA聚合酶同時發揮zuì大功效，提高反應效率。使用本產品可以得到更寬廣的線性范圍，對目的基因定量更準確，重復性好，可信度高。
ROX染料用于校正定量PCR儀孔與孔之間產生的熒光信號誤差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 擴增儀。不同儀器的激發光學系統有所不同，因此ROX染料的濃度必須與相應的熒光定量PCR儀相匹配。
不需要ROX校正的儀器:(WE0148)
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的儀器：(WE0149)
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的儀器：(WE0150)
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。
試劑盒組成：
| 組份 | WE0148-100次 | WE0149-100次 | WE0150-100次 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 1.4ml | 1.4ml | 1.4ml |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 100μl | 100μl | 100μl |
| 50×Low ROX | - | 50μl | - |
| 50×High ROX | - | - | 50μl |
| RNase-Free Water | 1.5ml | 1.5ml | 1.5ml |
注意事項：
1、本試劑盒中試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經短暫離心后使用。
2、本產品以RNA為模板進行一步法RT-PCR實驗，在操作過程中應避免RNase污染，建議在專門的區域進行RNA操作，使用專門的儀器和耗材，操作人員帶口罩和一次性手套并經常更換手套，實驗相關耗材應用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃處理12小時,并高壓滅菌30分鐘后使用。
3、本試劑盒中的各試劑應盡量避免反復凍融，反復凍融可能使產品性能下降。
4、本試劑盒必須使用特異性引物，引物的選擇可根據具體實驗來選擇，引物設計的好壞直接影響到RT-qPCR反應的結果，設計引物時需考慮GC含量，引物長度，引物位置，PCR產物的二級結構等因素，建議采用專業的引物設計軟件進行設計。
5、本試劑盒推薦使用特異性探針，建議采用專業的設計軟件進行設計。
使用方法：
以下舉例為常規的反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小的不同進行相應的改進和優化。(反應液的配置請在冰上進行)
1、將RNA模板、引物、2×BaldStar TaqMan One Step Buffer、BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上備用。
2、PCR反應體系：
| 試劑 | 25μl反應體系 | 終濃度 |
| 2×BaldStar TaqMan One Step Buffer | 12.5μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Reverse Primer，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| Probe，10μM | 0.5μl | 0.2μM |
| BaldStar TaqMan One Step EnzymeMix | 1.0μl | |
| RNA Template | Xμl | 10 pg～100ng |
| 50×Low ROX or High ROX(可選) | 0.5μl | 1× |
| RNase-Free Water | up to 25μl |
注意：
1)通常引物濃度以0.2μM可以得到較好結果，可以在0.1-1.0μM作為設定范圍的參考。
2)使用的探針濃度，與使用的熒光定量PCR儀、探針種類、熒光標記物質種類有關，實際使用時請參照儀器說明書，或各熒光探針的具體使用要求進行濃度的調節。
3)通常RNA模板的量以10 pg – 100ng為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定zuì佳的模板使用量。
4)不同儀器的激發光學系統有所不同，根據使用熒光定量的儀器選擇加入50×Low ROX or 50×High ROX。
3、混勻，短暫離心，將溶液收集到管底。
4、RT-PCR反應條件：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
| 逆轉錄 | 45℃ | 10 min | |
| PCR預變性 | 95℃ | 10 min | |
| 變性 | 95℃ | 15 s | 30-40個循環 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 s |
注意：
1)1)本產品所采用的熱啟動酶須在預變性95℃、5-10 min條件下實現酶的活化。
2)建議采用兩步法PCR反應程序，若因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試進行三步法PCR擴增，退火溫度請以 56℃-64℃的范圍作為設定參考。
儲存條件：-20℃，避免反復凍融
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